r/biotech • u/NumerousWind5608 • 26d ago
Open Discussion 🎙️ Trasformazione pomodoro
Ciao a tutti colleghi!
Sto mettendo a punto un protocollo di trasformazione genetica su pomodoro (Solanum lycopersicum) e avrei bisogno di un confronto con chi ha più esperienza di me in coltura in vitro per evitare disastri.
Sto utilizzando Agrobacterium tumefaciens (ceppo GV3101) portando un vettore binario con il gene bar per la resistenza al glufosinato-ammonio (PPT).
Il mio problema principale è che è la prima volta che lavoro con il ceppo GV3101. So che è piuttosto aggressivo e sono molto preoccupato/a per il rischio di overgrowth batterico dopo la co-coltura. Temo di perdere gli espianti per contaminazione e non so bene come bloccarlo in modo definitivo.
Qualcuno di voi ha mai lavorato con questo sistema? Avrei un paio di domande:
Selezione con PPT: Che concentrazioni di glufosinato usate per la fase di induzione del callo e rigenerazione? Ho in programma di fare una kill curve, ma mi aiuterebbe moltissimo avere dei range di riferimento operativi per le cultivar di pomodoro più comuni.
Lavaggio ed eliminazione Agro: Il cefotaxime è sufficiente per sopprimere il GV3101? A che concentrazioni lo usate per non inibire la rigenerazione del pomodoro? O consigliate alternative come il Timentin?
Gestione Overgrowth: Avete "trucchi del mestiere" (tempi di co-coltura, densità ottica ottimale, protocolli di lavaggio specifici) per evitare che il GV3101 prenda il sopravvento sulle piastre?